Méthode de dosage du phthalimide et du tétrahydrophthalimide, métabolites urinaires de deux fongicides (folpel et captane respectivement), par 2D-UHPLC-MS/MS : application lors d’une exposition environnementale

Objectif Le phthalimide (PI) et le tetrahydrophthalimide (THPI) sont des biomarqueurs urinaires specifiques de l’exposition a certains fongicides agricoles tels que le folpel pour le PI (viticulture) et le captane pour le THPI (arboriculture). Afin de documenter les valeurs usuelles mesurees en population generale, une methode de dosage du PI et du THPI urinaires a ete developpee et appliquee a titre exploratoire sur des urines d’un groupe d’enfants residant en zone viticole, potentiellement exposes au folpel present dans leur environnement. Methodes De structure chimique similaire, le PI et le THPI sont extraits simultanement a partir d’echantillons urinaires a l‘aide d’une methode solide-liquide (cartouche HLB 60 mg Oasis ® , Waters) et analyses par 2D-UHPLC-MS/MS (Shimadzu UFLC XR –Sciex QTRAP ® 5500 system) a l’aide d’une colonne de chargement (XBridge C 8 , 2,1 × 30 mm ; 5 μm, Waters ® ) et d’une colonne analytique (HSS-T 3 2,1 × 50 mm ; 1,8 μm, Acquity, Waters ® ) maintenues a 50 °C. La phase mobile se compose d’un melange eau/methanol, evoluant selon un gradient de concentration avec un debit fixe a 0,5 mL/min. Les transitions MRM (Multiple Reaction Monitoring) des composes et des etalons internes sont les suivantes : [ m/z 146,1 > 41,9 (PI) ; m/z 150,1 > 42,0 (PI-d 4 ) ; m/z 150,02 > 96,0 et m/z 150,02 > 42,1 (THPI) ; m/z 156,2 > 95,8 (THPI-d 6 )]. Apres validation, la methode a ete appliquee sur 312 urines d’enfants vivant dans une zone viticole afin de doser le PI, biomarqueur urinaire d’exposition au folpel. Les concentrations urinaires en PI sont rapportees en μg/L et egalement en μg/g de creatinine pour tenir compte de la diurese de chaque enfant. Resultats La methode developpee pour ce dosage permet d’obtenir des limites de detection (LDD) et de quantification (LDQ) respectivement de 0,1 μg/L et 0,25 μg/L pour le PI et de 0,01 μg/L et 0,025 μg/L pour le THPI. L’intervalle de linearite s’etend de 0,25 a 4 μg/L pour le PI et de 0,025 a 4 μg/L pour le THPI. Sur les 312 urines analysees d’enfants potentiellement exposes au folpel de maniere environnementale, 88 contenaient du PI (soit 28,2 % des enfants) avec une concentration mediane de 0,26 μg/L (0,12–5,28 μg/L ; min–max), soit 0,21 μg/g de creatinine (0,05–4,72 μg/g ; min–max). Conclusion La methode de dosage presentee apporte une amelioration des performances analytiques en termes de sensibilite par rapport aux donnees de la litterature (LDQ du PI de 3,75 μg/L et du THPI 1,90 μg/L [1] ), et en termes de specificite avec une methode en mode MRM et des etalons internes deuteres. Elle permet des applications en biometrologie des expositions environnementales, notamment pour des populations faiblement exposees mais egalement d’envisager la realisation de biometrologie des expositions professionnelles. C’est la premiere etude rapportant des donnees de concentrations urinaires en PI en population generale residant en zone viticole.