Investigation translationnelle de la chromatine

L’ADN s’organise via les histones, les principaux acteurs dans la compaction du materiel genetique. L’evolution technologique a favorise la decouverte de nombreux variants proteique. Toutefois, l’annotation de ces derniers s’est faite de maniere non conventionnelle, compliquant leur identification par spectrometrie de masse. Ainsi, j’ai developpe une banque de donnees exhaustive, intitulee MS_HistoneDB, dediee a la detection des variants d’histone par spectrometrie de masse. MS_HistoneDB permet l’utilisation d’echantillons murin et humain. En outre, l’utilisation de tests immunologiques permet difficilement de discriminer au niveau proteique des variants quasi-similaire. Ainsi, j’ai developpe une methode d’analyse de spectrometrie de masse ciblee pour detecter et quantifier les variants d’histones en un essai multiplexe. Cette methodologie a ete applique dans l’investigation de la chromatine au cours de la spermatogenese, dans des modeles murins, physiologique ou pathologique mimant l’infertilite masculine.Un autre aspect de mon travail s’est interesse aux proteines liant les formes modifiees des histones. Ainsi, j’ai etudie les « readers »de la famille BET (Bromodomaine et Extra-terminal domain). Ces proteines sont recrutees sur la chromatine via leurs bromodomaines, module specifique reconnaissant les histones acetylees. Leur domaine extra terminal joue le role de plateforme de recrutement de regulateurs transcriptionnels. Ces proteines sont conservees chez la levure Saccharomyces cerevisiae,et egalement chez les pathogenes fongiques responsables d’infections invasives, ou l’unique membre est appele Bdf1. Ainsi, j’ai etudie le domaine extra-terminale de Bdf1 et demontre qu’il est essentiel a la survie des levures. Puis, j’ai explore les mecanismes moleculaires impliques. Enfin, des inhibiteurs selectifs sont en cours de developpement dans des especes de levure pathogene. L’ensemble de ces travaux ouvrent la voie au developpement d’une nouvelle classe therapeutique d’antifongiques.