Proteins of the kallikrein‐kinin system in human semen Isolation and properties of kininase II: Proteine des Kallikrein‐Kinin‐Systems im menschlichen Samen Isolierung und Eigenschaften von Kininase II

Summary A rapid and highly efficient procedure for purification of kininase II from human seminal plasma is described. After ultracentrifugation, the enzyme was purified by gel filtration on Sepharose 6B CL and ion exchange chromatography followed by affinity chromatography of EDTA-inhibited enzyme on bradykinin-Sepharose. The enzyme was specifically inhibited by Captopril® and BPP9a but not by phosphoamidon. PAGE in the presence of sodium dodecyl sulfate under reducing conditions resulted in two major protein bands with apparent molecular masses of about 55 kDa and 65 kDa and two faint protein bands at higher molecular masses. Antibodies raised against the major protein bands showed full cross reactivity with all four protein bands. The presented data indicate that kininase II of subunits. Zusammenfassung Ein schnelles und effizientes Verfahren zur Isolierung von Kininase II aus menschlichem Seminalplasma wird beschrieben. Das Enzym wurde zuerst durch Ultrazentrifugation, Gelchromatographie an Sepharose 6B CL und anschliesender Ionenaustausch-Chromatographie gereinigt. Der letzte Reinigungsschritt bestand aus einer Affinitatschromatographie von EDTA-gehemmtem Enzym an Bradykinin-Sepharose. Das Enzym wurde spezifisch von Captopril® und BPP9a gehemmt, jedoch nicht durch Phosphoamidon. SDS-Gelelektrophorese unter reduzierenden Bedingungen zeigte zwei Proteinbanden mit apparenten Molekularmassen bei 55 kDa und 65 kDa sowie zwei schwache Banden bei hoheren Molekularmassen. Antikorper, die gegen die beiden Hauptbanden erhalten wurden, zeigten voile Kreuzreaktion gegen alle vier Proteinbanden. Die vorge-stellten Daten weisen darauf hin, das Kininase II aus Untereinheiten besteht.